引言 ：作者發表過一篇“化藥工作對照品標定過程”引起了讀者討論，于是就有了本篇文章，本文主要介紹沒有法定對照品的化藥對照品的標定方法。

對照品含量標定方法需要至少兩種經方法學驗證的測定方法進行標定，并采用兩種以上不同分離機理或經驗證的不同色譜方法相互驗證比較，同時采用二極管陣列檢測器檢測色譜峰純度（如果無合適的另一種方法，就采用不同儀器分別進行測定），對測定結果統計分析確定對照品的純度，色譜法確定純度后扣除有關物質、熾灼殘渣、水分和殘留溶劑等后的理論含量確定為對照品的含量。

對于組份單一、純度較高的藥物，對照品標定方法宜首選可進行等當量換算、精密度高、操作簡便快速的容量法。可根據藥物分子中所具有的官能團及其化學性質，選用不同的容量分析方法，但應符合如下條件：

1.反應按一個方向進行完全；

2.反應迅速，必要時可通過加熱或加入催化劑等方法提高反應速度；

3.共存物不得干擾主藥反應，或能用適當方法消除；

4.確定等當點的方法要簡單、靈敏；

5.標化滴定液所用基準物質易得，并符合純度高、組成恒定且與化學式符合、性質穩定（標定時不發生副反應）等要求。

1. 對照品含量要求：（精制后的原料藥，必須高于原料純度）

1.1主成分對照品含量要求：含量一般不低于99.5%（折干后）。  

1.2雜質對照品含量要求：含量一般不低于95.0%（折干后）。

2. 高效液相色譜法測定純度時要求  

2.1供試品濃度要求：分析方法有關物質項下濃度。 

2.2檢測波長選擇：首選有關物質項下條件，同時結合DAD/PDA結果查看多個波長項下(可分別選各個雜質最大吸收波長)結果，以平均值計算結果（雜質對照品小于5%以內，主成分對照品小于1%以內）。  

2.3流動相選擇：首選有關物質項下條件，如果出峰時間過短（小于5min）可適當調整色譜條件，以延長其保留時間考查。  

3. 對照品標定方法  

3.1純度的測定

3.1.1高效液相色譜法純度的測定

在兩臺不同儀器上分別進行測定，6樣6針，采用面積歸一化法，計算主成分峰面積百分比，以二者平均值計算純度。 

3.1.2薄層色譜法純度的測定

使用TLC法時，使用3種不同展開劑對對照品進行鑒別，并且至少在一種條件下的斑點足夠大到稍有拖尾，如果3次都只得到一個斑點，說明其基本為純物質。

3.1.3 差示掃描量熱法

DSC法是一種簡便、快速、可靠且試樣用量少的方法，尤其適合雜質對照品純度的測定。《美國藥典》從 16 版開始至今一直將DSC法用于對照品的純度檢查。

3.2滴定法含量的測定

照電位滴定法（中國藥典2015版 四部 通則0701），滴定6份供試品進行測定，并將滴定的結果用空白試驗校正，計算滴定度（采用四位有效數字）。  

注意事項：

①供試品的取用量應滿足滴定精度的要求；

②滴定終點的判斷要明確，提供滴定曲線。如選用指示劑法，應考慮其變色敏銳，并用電位法校準其終點顏色；

③要給出滴定度（采用四位有效數字）的推導過程。

3.3其他檢測項檢測

3.3.1殘留溶劑測定 

取本品，照殘留溶劑測定法進行測定（中國藥典2015版 四部 通則0861），采用外標法進行測定時，配制6個樣品，或采用兩種不同的內標物按內標法測定，取殘留溶劑量的平均值進行計算。

3.3.2水分測定  

取本品，照水分測定法（中國藥典2015版 四部 通則0832）進行測定，供試品 6 份進行測定，根據水分含量平均值進行計算。

3.3.3干燥失重測定

取本品，供試品2份，照干燥失重測定法（中國藥典2015版 四部 通則0831）干燥至恒重，計算干燥失重平均結果。

3.3.4熾灼殘渣   

取本品，供試品2份，照熾灼殘渣測定法（中國藥典2015版 四部 通則0841）測定，根據供試品測定平均值計算結果。

3.4計算公式

3.4.1濕品含量=色譜純度*（1-殘留溶劑%-水分%-殘渣%）或

濕品含量=色譜純度*（1-干燥失重%-殘渣%）

3.4.2含量=濕品含量/（1-干燥失重%）*100%。（限度應為 99.0~101.0%）

 注：自制的雜質對照品建議直接采用減壓干燥（穩定的話）至恒重后的樣品標定，含量=色譜純度*（1-殘渣%），采用合適包裝密封，貼上標簽標明品名、批號、標定含量、數量、標定日期、有效期，這樣使用時可直接使用，無需再折算。

4. 申報時需要形成的文件   

4.1驗證報告包括：

4.1.1總體情況說明：包括對照品理化性質、合成或生產工藝路線及純化方法、貯藏和制備量等情況；

4.1.2結構確證：包括質譜（MS）、核磁（NMR）、紫外（UV）、熔點、元素分析或高分辨、薄層（TLC）或高效液相（HPLC）、差示掃描量熱法（DSC）、 X粉末衍射、紅外（IR）等；

4.1.3標定所用方法：不同含量測定方法測定、水分測定、殘留溶劑測定（或干燥失重測定）、灼熾殘渣測定等；

4.1.4提供分析報告（COA）。

4.2提供對照品質量標準

以上僅為個人總結，如有不同意見，歡迎交流，互相學習。 

參考文獻：   

1.Spiraeoside 對照品制備方法及驗證  

2.國家藥品標準物質協作標定設計方案   

3.張哲峰，藥品審評中心.對藥品注冊中對照品（標準品）有關技術要求的幾點思考

4.化學藥品對照品標定方法（第一稿）

5.中國藥品生物制品檢定所關于標準品（對照品）的規定

6.藥物中雜質對照品的標定項目與純度測定方法研究進展