液相色譜定量分析原理

液相色譜定量分析原理

在定性的基礎上定量,需有純物質作為標準物液相色譜定量是相對定量的方法:即由已知量的純標樣推算混合物中被測物的量定量的依據是:

被測組分的量與響應值(峰高或峰面積)成正比

由已知量的標樣可求得定量校正因子

定量校正因子:是定量計算公式中的比例常數,其物理意義是單位響應值(峰面積)所代表的被測組分的量

測定未知組分的響應值,通過定量校正因子即可求得其含量

液相色譜定量分析的步驟

1、選擇一個適合定量分析的色譜方法：

確認被檢測組分峰,并達到分離度(R)大于1.5

確定被測組分色譜峰的一致性(純度)

確定方法的檢測限及定量限;靈敏度及線性范圍

2、用不同濃度的標準樣品建立校正曲線

3、考查定量方法的準確度及精密度

4、用相應的色譜管理軟件實施樣品采集,數據處理及報告結果

鑒別需定量的色譜峰(定性)定性鑒別每個要定量的色譜峰

首先用標樣確定欲定量之色譜峰的保留時間(Rt)，通過比較保留時間,找到未知樣中各色譜峰所對應的組份，色譜定性是用與標樣比較保留時間的方法，判據并不充分進一步的確認(定性)1、標準加入法

2、同時用其它方法：其它色譜方法(改變機理,如:用不同的色譜柱) 、其它檢測器 （PDA：光譜圖比較、譜庫檢索；MS：質譜圖解析、譜庫檢索）3、其它儀器方法

確認定量峰的一致性確認色譜峰的一致性(純度)

保證每個色譜峰下只有一個被測的組份

檢查是否有共流出的物質（雜質）干擾

色譜峰一致性(純度)確認的方法

用光電二極管矩陣(PDA)檢測器比較光譜圖

峰純度鑒定

2996的純度角理論

常用的定量方法標準曲線法,分為外標法和內標法:

外標法：在液相色譜中用得最多

內標法：準確，但是麻煩，在標準方法中用得最多

影響定量分析結果的因素

準確度不好可能由下述原因造成:

–峰面積積分不正確、樣品分解或制樣時導入雜質、樣品瓶不密封,樣品或溶劑揮發、制樣不正確、進樣問題、內標制備不正確

精密度不好可能的原因:

峰積分不正確、進樣或進樣器有問題、樣品分解或制樣時引入了雜質、色譜問題、檢測器響應下降